基因擴(kuò)增儀起著關(guān)鍵作用--全程實(shí)地監(jiān)測(cè)
發(fā)布時(shí)間：2014-05-19 閱讀：360次
摘要：基因擴(kuò)增儀熒光定量PCR技術(shù)是一次由定性技術(shù)向定量技術(shù)的飛躍，運(yùn)用該項(xiàng)技術(shù)，可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行相對(duì)定量、定量和定性分析。它的關(guān)鍵性作用有什么，具體體現(xiàn)在哪些設(shè)計(jì)？
、基因擴(kuò)增儀定義：
基因擴(kuò)增儀對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤，實(shí)時(shí)監(jiān)控反應(yīng)過(guò)程。隨著PCR 反應(yīng)的進(jìn)行，反應(yīng)產(chǎn)物不斷累積，熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過(guò)一個(gè)循環(huán)，收集一次熒光強(qiáng)度信號(hào)，這樣就可以通過(guò)熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化，結(jié)合相應(yīng)的軟件對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行分析，可以得到熒光擴(kuò)增曲線(xiàn)，計(jì)算待測(cè)樣品初始模版的量。實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)是一次由定性技術(shù)向定量技術(shù)的飛躍，運(yùn)用該項(xiàng)技術(shù)，可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行相對(duì)定量、定量和定性分析。
第二、基因擴(kuò)增儀起著關(guān)鍵的作用：
所謂real-time Q-PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)累積實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。在 real-time 技術(shù)的發(fā)展過(guò)程中，兩個(gè)重要的發(fā)現(xiàn)起著關(guān)鍵的作用：
1.它能降解特異性熒光記探針，因此使得間接的檢測(cè)PCR產(chǎn)物成為可能。
2.此后熒光雙標(biāo)記探針的運(yùn)用使在一密閉的反應(yīng)管中能實(shí)時(shí)地監(jiān)測(cè)反應(yīng)全過(guò)程。
第三、它的具體體現(xiàn)有：
1.一機(jī)多用，無(wú)須換樣品座模塊，使用方便。
2.數(shù)量的基因擴(kuò)增儀反應(yīng)管、反應(yīng)板實(shí)驗(yàn)要求，大大節(jié)省了購(gòu)買(mǎi)不同模塊備件的費(fèi)用。
3.采用半導(dǎo)體Peltier熱循環(huán)控溫技術(shù)，控溫、速度快、節(jié)省實(shí)驗(yàn)時(shí)間。
4.可調(diào)節(jié)式熱蓋防蒸發(fā)，加樣無(wú)油操作，簡(jiǎn)單無(wú)污染，確保PCR擴(kuò)增產(chǎn)物后處理的可靠。
5.具有溫度/時(shí)間，遞增/遞減等增強(qiáng)功能，可做降落（Touch down）PCR、長(zhǎng)（Long）PCR、巢式PCR、NASBA、 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（LAMP）、連接酶鏈（LOR)、多態(tài)擴(kuò)增分析等復(fù)雜操作。
6.樣品基座BLOCK和管內(nèi)TUBE模擬兩種控溫模式可選；采用管內(nèi)控溫模式時(shí)軟件根據(jù)用戶(hù)設(shè)定的擴(kuò)增反應(yīng)體積， 自動(dòng)優(yōu)化體積差異和動(dòng)態(tài)穩(wěn)定，實(shí)現(xiàn)佳擴(kuò)增效果。
為改進(jìn)提高本方法的自動(dòng)化水平，有人設(shè)計(jì)了機(jī)械手裝置，替代上述手工移動(dòng)標(biāo)本過(guò)程，形成了機(jī)械手水浴式基因擴(kuò)增儀，該改進(jìn)解決了實(shí)驗(yàn)人員的高強(qiáng)度勞動(dòng)問(wèn)題，但又帶來(lái)了一個(gè)機(jī)械手部件大行程頻繁相對(duì)運(yùn)動(dòng)而引起的高故障。
