PCR儀的使用方法和注意事項(xiàng)
發(fā)布時(shí)間：2013-09-24 閱讀：640次
PCR儀，也稱DNA熱循環(huán)儀、基因擴(kuò)增儀，它是使一對寡核苷酸引物結(jié)合到正負(fù)DNA鏈上的靶序列兩側(cè)，從而酶促合成拷貝數(shù)為百萬倍的靶序列DNA片段，它的每一循環(huán)包括在三種不同溫度進(jìn)行DNA變性、引物復(fù)性、dna聚合酶催化的延伸反應(yīng)的三個(gè)過程。
PCR儀主要應(yīng)用于基礎(chǔ)研究和應(yīng)用研究等許多領(lǐng)域，如基因分析、序列分析、進(jìn)化分析、臨床診斷、法醫(yī)學(xué)等等。隨著分子生物學(xué)的不斷發(fā)展，pcr擴(kuò)增技術(shù)也得到普及推廣應(yīng)用，因此了解PCR儀的性能，熟練掌握儀器的正確使用方法及使用過程中的注意事項(xiàng)，將是十分必要的。
現(xiàn)介紹PCR 擴(kuò)增儀(Tl thermocycler)的使用方法和注意事項(xiàng)。
1. 使用方法
(1)接通電源開關(guān)，儀器進(jìn)入準(zhǔn)備狀態(tài);在顯示屏上記錄了當(dāng)前儀器的溫度和蓋子(Lid)的溫度。若儀器正在運(yùn)行時(shí)，須按“ B ”鍵(start/stop)，才能退出運(yùn)行并返回準(zhǔn)備狀態(tài)。
(2)編寫程序段。在準(zhǔn)備狀態(tài)下按“ C ”鍵(programs)進(jìn)入編程狀態(tài)，選定一程序號(hào)，然后按“enter”鍵，進(jìn)入下一程序;按 “A”(list)鍵后，選一文件號(hào)(empty program);再按“enter”鍵，進(jìn)入下一程序;按“ABC”鍵，進(jìn)入下一程序，用上下左右鍵號(hào)選擇一個(gè)字母(A、B、C、D、…)，然后按“enter”鍵，進(jìn)入下一程序;按“name ok”鍵，完成文件命名。
(3)設(shè)定蓋子的溫度。“lid temp： ℃”，蓋子的溫度一般比變性溫度要高10℃，例如變性溫度是95℃，那么蓋子的溫度就要設(shè)定為105℃。待蓋子預(yù)熱后按“enter”鍵，進(jìn)入下一程序。
(4)設(shè)定變性溫度、變性時(shí)間、延伸溫度、延伸時(shí)間、退火溫度、退火時(shí)間及循環(huán)總數(shù)等參數(shù)。從步依次按“enter”鍵進(jìn)入，用四個(gè)移位鍵移動(dòng)設(shè)定位置。先設(shè)定溫度，后設(shè)定時(shí)間，全部參數(shù)設(shè)置完后，按“pgm ok”鍵，所設(shè)定的程序自動(dòng)被保存。
(5)運(yùn)行程序。檢查設(shè)定是否正確， 按“start”鍵，選擇設(shè)定好的程序，開始運(yùn)行。顯示屏上可觀察到系統(tǒng)運(yùn)行的情況，按“Stop”可停止運(yùn)行。
